(1)靈芝培養(yǎng)基的制備與菌種的分離

①母種培養(yǎng)基配方及制備

母種培養(yǎng)基 多采用馬鈴薯一瓊脂(PDA)培養(yǎng)基，其配方：馬鈴薯(去皮)200克，葡萄糖20克，瓊脂20克，磷酸二氫鉀3克，硫酸鎂1.5克，維生素B11～2片，水l000毫升。

制備方法 按常規(guī)方法進(jìn)行。培養(yǎng)基制成后，調(diào)節(jié)pH值4～6，分裝試管，高壓滅菌30分鐘，稍冷卻后擺成斜面培養(yǎng)基。

②靈芝純菌種的分離 常用有組織分離法和孢子分離法兩種。

組織分離法 在無(wú)菌的條件下，選取新鮮、成熟的靈芝，于菌蓋或菌柄內(nèi)部切取一小塊黃豆大小的組織塊，接種在斜面培養(yǎng)基上。置溫度24～26℃下培養(yǎng)7～10天;當(dāng)白色菌絲布滿(mǎn)斜面時(shí)，即得母種，然后再擴(kuò)大培養(yǎng)成原種和栽培種。

孢子分離法 在無(wú)菌的條件下，取新鮮成熟的靈芝菌，于馬鈴薯培養(yǎng)基上培養(yǎng)一段時(shí)間，溫度控制在24～26℃左右，培養(yǎng)基表面上便形成與子實(shí)體(小靈芝)相似物，在貼近管壁處形成菌管，自菌管管口中散發(fā)出孢子粉，便是純孢子粉，將此孢子粉接種到培養(yǎng)基上獲得一層薄薄的菌苔狀的營(yíng)養(yǎng)菌絲，即得靈芝純菌種。

(2)人工栽培方法 目前多采用瓶栽和段木培養(yǎng)兩種方法。

①靈芝瓶栽法

培養(yǎng)料配方 棉子殼80%，麩皮16%，蔗糖1%，生石膏3%。加水適量，混拌均勻，使培養(yǎng)料含水量在60%～70%左右，以手握之不出水為度，調(diào)節(jié)pH值5～6。

裝瓶滅菌 料拌均勻后，先悶l小時(shí)，然后裝入廣口瓶中，裝料要上緊下松，裝量距瓶口3～5厘米即可。裝好后用尖圓木棒打一通氣孔，擦凈瓶體，用塑料薄膜加牛皮紙?jiān)o瓶口，然后進(jìn)行滅菌(高壓滅菌，壓力1.1千克/每平方厘米，時(shí)間1.5小時(shí);常壓滅菌100℃，保持8～10小時(shí)，再悶12小時(shí))。

接種 在無(wú)菌室內(nèi)進(jìn)行。用75%的酒精消毒接種工具，然后用右手拿接種耙在酒精燈火焰上滅菌，左手拿菌種瓶，并打開(kāi)菌種瓶口，在火焰旁用接種耙取出一塊小棗大小的菌種，迅速放人栽培料瓶中，經(jīng)火焰燒口，用牛皮紙包扎好，置于培養(yǎng)室內(nèi)培養(yǎng)。

培養(yǎng)與管理 在溫度20～26℃，空氣相對(duì)濕度在60%以下，約培養(yǎng)20～30天，菌絲即可長(zhǎng)滿(mǎn)全瓶;再繼續(xù)培養(yǎng)，培養(yǎng)料上就會(huì)長(zhǎng)出l厘米大小的白色疙瘩或突起物，即為子實(shí)體原基??芝蕾。當(dāng)芝蕾長(zhǎng)到接近瓶塞時(shí)，拔掉瓶口棉塞，讓其向瓶外生長(zhǎng)，這時(shí)，控制室溫在26～28℃，空氣相對(duì)濕度在90%～95%，保持空氣新鮮，給以散射光等條件，突起物芝蕾向上伸長(zhǎng)成菌柄，菌柄上再長(zhǎng)出菌蓋，孢子可從菌蓋中散發(fā)出來(lái)。從接種到長(zhǎng)出菌蓋，約需2個(gè)月時(shí)間。生長(zhǎng)期要注意管理，每天要通過(guò)定時(shí)開(kāi)窗的辦法換氣，如在氣溫偏高時(shí)，上、下午都要開(kāi)窗。

②靈芝段木培養(yǎng)法

段木的選擇 應(yīng)選用櫟、栗、柞、桃、柳、楊、刺槐等闊葉樹(shù)作段木。直徑5～15厘米均可選用。鋸成l米長(zhǎng)的段木，不要削皮，碼堆干燥。

接種 選擇培養(yǎng)20天左右子實(shí)體原基剛形成的新鮮菌種。這種菌種生命力強(qiáng)，接入段木后發(fā)育快，且不怕雜菌污染。接種工具可用直徑1～1.2厘米的打孔器或電鉆頭。打入段約l厘米深，行株距20厘米×20厘米，呈品字形排列。打孔后立即接種。接種前先將菌種取出，截成l平方厘米的水塊，輕輕塞入孔穴中，稍壓緊后蓋上樹(shù)皮。30天后，菌絲便浸入段木，并可見(jiàn)孔穴四周形成棕色菌圈，說(shuō)明接種成功。立即將段木埋入pH值5～6的酸性土壤中，若天氣干旱，可淋水濕潤(rùn)土壤。遇雨季或雨天，要注意排水。此外，還要在栽培場(chǎng)周?chē)鲆蝗Π栌袦缦侅`的毒土，誘殺白蟻，防止危害段木。第二年清明節(jié)后，當(dāng)氣溫升至25℃左右，可取出數(shù)根段木檢查：揭開(kāi)樹(shù)皮蓋，見(jiàn)孔穴周?chē)验L(zhǎng)成茶褐色，或已長(zhǎng)出芝蕾;段木兩端有白色菌絲或淺褐色菌膜，并可嗅到靈芝菌絲的特殊氣味，顯示菌絲已成熟。立即將段木挖出，截成長(zhǎng)17～22厘米的小段木，然后，將其斜埋入酸性含砂礫的土壤中，上端露出地面約3厘米，且覆蓋雜草遮蔭，隔數(shù)日灑一次水，保持土壤濕潤(rùn)，經(jīng)7～l0天開(kāi)始長(zhǎng)出芝蕾。在生長(zhǎng)芝蕾期，栽培場(chǎng)要保持90%的相對(duì)濕度，約2個(gè)月左右芝蕾長(zhǎng)成靈芝成品，即可采收。